ASP探針，即變構(gòu)信號(hào)探針，是一種通過(guò)構(gòu)象變化來(lái)輸出熒光信號(hào)的探針，常用于生物傳感和PCR檢測(cè)中。提升ASP探針的檢測(cè)準(zhǔn)確性，關(guān)鍵在于優(yōu)化其設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)條件和數(shù)據(jù)分析。具體介紹如下：
ASP探針提升檢測(cè)準(zhǔn)確性的方法
- 優(yōu)化探針設(shè)計(jì)：通過(guò)裁剪和優(yōu)化適配體序列，設(shè)計(jì)出具有高親和力和穩(wěn)定性的二價(jià)適配體，作為ASP探針。例如，對(duì)原始適配體進(jìn)行粗細(xì)裁剪，以獲得最適合設(shè)計(jì)成變構(gòu)信號(hào)探針的序列。
- 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化：優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，如鈉離子濃度、鎂離子濃度、孵育時(shí)間等，以提高ASP探針的檢測(cè)性能。例如，本研究最終獲得的最佳條件是：鈉離子濃度為0，鎂離子濃度為10 mM，孵育時(shí)間為30 min。
- 數(shù)據(jù)分析與驗(yàn)證：通過(guò)qRT-PCR獲得Ct值來(lái)評(píng)估探針與靶標(biāo)的結(jié)合親和力，確保探針的特異性和準(zhǔn)確性。例如，加標(biāo)β-LG的平均回收率為87.6% ~ 99.9%，RSD≤4.1%，表明該方法對(duì)實(shí)際樣品中β-LG的檢測(cè)具有較高的準(zhǔn)確性。
ASP探針在生物傳感和PCR檢測(cè)中的應(yīng)用
- 生物傳感：ASP探針可用于免標(biāo)記熒光磁性生物傳感器中，實(shí)現(xiàn)對(duì)食品中痕量過(guò)敏原的檢測(cè)。這種傳感器具有成本低、檢測(cè)快速、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高的優(yōu)勢(shì)。
- PCR檢測(cè)：ASP探針也可用于qPCR中，通過(guò)熒光共振能量轉(zhuǎn)移原理，實(shí)現(xiàn)對(duì)靶標(biāo)的定量和分類。例如，TaqMan探針和MGB探針是常見(jiàn)的熒光探針類型，用于提高PCR檢測(cè)的特異性和靈敏度。
ASP探針與其他探針技術(shù)的比較
- TaqMan探針：TaqMan探針是一種寡核苷酸探針，其5’末端攜帶熒光基團(tuán)，3’端攜帶淬滅基團(tuán)。當(dāng)探針完整時(shí)，熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收，探針被水解后，熒光信號(hào)可以被檢測(cè)到。MGB探針是在TaqMan探針的基礎(chǔ)上做的優(yōu)化改進(jìn)，通過(guò)加入小溝結(jié)合物（MGB）來(lái)提高探針的TM值和雜交反應(yīng)的特異性。
通過(guò)上述方法，可以有效提升ASP探針在生物傳感和PCR檢測(cè)中的準(zhǔn)確性，從而在各種應(yīng)用中發(fā)揮更大的作用。
